CFPS攻无不克 膜蛋白难题迎刃而解

膜蛋白在细胞的物质运输、信号转导、增殖分化等许多生命活动中起着非常重要的作用，是重要的药物靶点。然而，由于表达量低、构象不稳定、难分离纯化等原因，许多研究受限于膜蛋白难表达而止步不前。

山东农业大学某课题组就遇到这样一个难题：某膜蛋白用原核体系难以表达，经过两年时间反复尝试，仍未攻克难关。

珀罗汀生物基于自主研发的无细胞蛋白表达（CFPS）系统，已成功表达多例全长跨膜蛋白。该课题组慕名而来，在进一步了解CFPS技术以及珀罗汀生物在无细胞领域的技术优势之后，决定委托珀罗汀生物，利用CFPS平台尝试表达该膜蛋白。

收到客户质粒后，珀罗汀生物研发人员立即着手构建线性表达模板，为了直接观测目标膜蛋白的表达情况并提高其可溶性，研发人员还构建了融合GFP的表达模板。随后，采用专研的针对膜蛋白的CFPS体系（即PLDK002试剂盒来源体系），并添加去垢剂^【1】，于收到质粒当天完成无细胞反应体系构建。

实验设计：

注：【1】该去垢剂是依据珀罗汀生物膜蛋白表达案例库的实验数据选出。

图1融合GFP的目标膜蛋白在照胶仪下发出绿色荧光

图2 目标膜蛋白SDS-PAGE结果图

经考染、脱色后，如图2所示，未融合GFP的目标膜蛋白（A1、A2组）同样在上清液中可溶表达！此外，分别对比A1、A2组与B1、B2组可以发现，添加去垢剂可促进该膜蛋白的可溶表达。

珀罗汀CFPS系统不负众望，两天之内，成功表达了困扰该课题组长达两年的膜蛋白，“难表达蛋白的救星"名副其实！本次实验的成功，再次显示出珀罗汀CFPS技术在膜蛋白等难度蛋白表达领域中的绝伦。